古代的细胞实行往往须要大方的手工操作，提拔时代就有一到两周，好阻挡易到了细胞折柳、检测的阶段，又要面对「约流式仪器、分选时代较长、细胞活性毁伤」等危急，容易「竹篮打水一场空」。迩来做免疫、血液细胞的师弟又正在细胞间门口抱怨：
流式分选时代长、细胞活性受损，根本没门径接收。你这实行，我用磁珠分选一周能出 2 批结果，导师见了都猛猛夸。
血液是一种卓殊庞杂的基质，由多数种拥有差别成效的细胞构成。运用磁珠针对特定细胞皮相抗原的配体或抗体对细胞实行分选或去除，再适合但是了。
刚做磁珠分选时，恐怕还会通常遭遇细胞接收率、活性等题目。本文收拾磁珠实行根天职类以及常见 QA，给你带来二倍速细胞实行体验。同时，咱们还打算了有奖调研福利，点此链接或到文末完结调研即可插手抽奖，赢保温杯、自愿晴雨伞、京东卡等好礼哦~
磁珠法细胞折柳是一种高效、简明的细胞折柳身手，遍及操纵于生物学和医学钻研。通过将磁性微珠与特定抗体集合，应用磁场的效率完成对主意细胞的火速、高效折柳。这种举措不单简化了古代的细胞折柳流程，还提升了折柳的纯度和速率。
磁珠分选身手能够实行细胞的阳性和阴性分选以及细胞去除。阳性分选时，特定的磁性集合细胞会被固定，直到从磁力架上移除，而上清液则会被丢掉。阴性分选时，靶细胞群正在上清液中。对待细胞去除，则是运用细胞特异性磁珠从羼杂细胞样本中去除特定的不须要的细胞类型。这一身手正在 T 细胞等免疫细胞的折柳中尤为苛重。
Invitrogen™ Dynabeads™ 磁珠是一种平均、无孔、单散漫的超顺磁性聚苯乙烯微珠，遍及用于百般操纵中。这些磁珠拥有一概的物理和化学性情，过去 30 多年来，正在供应针对免疫编造细胞和其他细胞类型的高功能细胞折柳产物方面阐扬了苛重效率。
正在实行 Dynabeads 细胞折柳和扩增实行时遭遇困苦，若何办？以下 QA 可供科研职员参考：
● 正在羼杂措施中能够运用 Invitrogen™ HulaMixer™ 样品混匀器（货号 15920D），确保抗体与主意细胞充实集合。
● 正在羼杂措施中能够运用 Invitrogen™ HulaMixer™ 样品混匀器（货号 15920D），以确保折柳流程中的充实羼杂。
● 正在终末一个措施中，细胞/磁珠颗粒正在安排到磁力架上之前必需用 1 mL 移液管充实重悬 10 次。如许做是为了捉拿恐怕被困正在细胞团中的主意细胞。
● 用于筑造折柳和洗涤缓冲液的 PBS 应不含 Ca2+ 和 Mg2+，以避免补体活化和细胞鸠集。
A：正在折柳单核细胞时，活化的血幼板会与单核细胞集合，爆发倒霉的单核细胞和血幼板鸠集。激励血幼板活化的身分有多种，如温度蜕化、呆滞身分（如剪切力）、接触抗凝剂肝素（大凡存正在于采样管中）等。为避免血幼板活化（以及随后的单核细胞鸠集），应遵从以下几项日常倡导：
● 样本执掌时应温柔，尽量削减呆滞剪切。假如恐怕，应运用打针器/针头手动抽血，而不是 Vacutainer™ 管，由于这种采样管中的真空往往会导致血幼板和单核细胞活化。
● 家喻户晓，柠檬酸钠能「安靖」血幼板并防卫活化，除了行动抗凝剂的缓冲柠檬酸盐溶液表，柠檬酸钠还含有茶碱、腺苷和双嘧达莫。
A：污染是 DETACHaBEAD™ 磁珠的平常景色，由于卵白质含量很高，卵白质会浸淀。这并非细菌污染，不会影响折柳和开释细胞的接收或生机。运用前请彻底羼杂溶液。
● 孵育措施中磁珠与样品的羼杂是取得高产量的枢纽参数。咱们倡导运用羼杂器或扭转器（如 HulaMixer™ 样品羼杂器（货号：15920D）），使试管继续运动，但要使样品中止正在试管底部，以避免珠子干燥。
● 用 DETACHaBEAD™ 磁珠孵育后，正在运用磁力架之前，用移液管上下奏笑与磁珠集合的细胞起码 10 次，以尽恐怕多地将磁珠从细胞上移除。过于使劲的移液会下降细胞存活率。
● 样品造备卓殊苛重。扫数折柳都必需正在单细胞悬浮液中实行。对待直接从全血平折柳某些类型的细胞（如单核细胞），倡导您正在折柳前洗涤血液，以去除样品中的搅扰身分。
● 扫数指定「羼杂」的孵育都必需运用恰当的羼杂器。可运用任何可倾斜扭转或端端羼杂的羼杂器（如 HulaMixer™ 样品混匀器（货号 15920D））。
● 假如运用 FlowComp™ 试剂盒，先正在细胞中参预抗体，然后再参预磁珠（间接法），则应正在参预磁珠前通过洗涤去除多余的抗体。
● 运用开释剂孵育后，倡导运用 1 mL 移液管奏笑 10 次，从头悬浮样品，然后再将样品安排正在磁力架上。
● 细胞折柳必需运用推选的折柳缓冲液。PBS 必需不含 Ca2+ 和 Mg2+，由于这些二价离子会导致补体激活和细胞鸠集。
Q：能否供应少许提升 Dynabeads™ FlowComp™ 细胞折柳试剂盒开释服从的倡导？
● 因为 DSB-X 生物素-链霉亲和素键会跟着时代的推移而变强，因而开释措施的时代不要抢先计划中法则的时代。正在某些环境下，缩短孵育时代可提升产量。
● 运用开释剂孵育后，倡导运用 1 mL 移液管奏笑 10 次，从头悬浮样品，然后再将样品安排正在磁力架上。
A：推选将 Dynabeads™ FlowComp™ Flexi 试剂盒与符合的主意抗体集合运用，实行细胞折柳。Flexi 试剂盒包括用于抗体生物素化的 DSB-X 生物素化试剂盒、经粉饰的链霉亲和素包被的 FlowComp™ Dynabeads™ 磁珠以及实行折柳和开释所需的 FlowComp™ 开释缓冲液。
● 必需温和执掌 DNase I。激烈搅拌 DNase 溶液会下降酶的活性。切勿搅动 DNA 酶溶液。
● 分选少量细胞时，倡导运用 RPMI + 10% FBS 预涂试管，以削减细胞遗失（细胞有粘性，正在分选流程中容易附着正在管壁上）。
● 用 DNase 开释缓冲液提拔细胞后，必需正在磁折柳前用移液管彻底吸出磁珠-细胞复合物，以便对 DNA 接连体实行呆滞阻挠。假如错误细胞实行移液，将影响细胞产量。
● 用 DNase 开释缓冲液孵育细胞后，必需正在磁折柳前用移液管彻底吸出磁珠-细胞复合物，以便对 DNA 接连体实行呆滞阻挠。假如错误细胞实行移液，将影响细胞产量。
● 细胞密度必需依旧正在 0.5～1.5 x 106 细胞/mL ，以取得最佳成长形态。当细胞密度抢先 1.5～2.5 x 106 细胞/mL 时，须要从头刺激。
● 遵循产物手册，针对每种特定产物运用确切的磁珠与细胞比率实行活化。过多的磁珠会遏抑细胞活化/增殖。
推动成长的填充剂（如人血清/FBS、L-谷氨酰胺/谷氨酰胺、自正在基肃除剂（10 mM N-乙酰半胱氨酸）
